规模化牛场奶牛衣原体和布鲁菌病相关抗体的检测分析*

2007-08-26 00:00:00 来源:

  摘 要:为检测并分析银川地区规模化牛场牛衣原体和布鲁菌病的相关抗体,采用鹦鹉热衣原体McAb-ELISA方法和布鲁菌虎红平板凝集试验(RBPT)方法进行特异性检测,应用McAb-ELISA方法与传统的IHA试验方法分别对同样50份待检牛血清进行衣原体抗体的比较检测。结果表明,银川地区的16个牛场1 161份牛血清衣原体总的阳性率为9.22%。布鲁菌的血清阳性率为13.26%。对50份牛血清采用2种试验方法同时进行衣原体抗体检测, ELISA阳性检出率为32%,IHA为24%。McAb-ELISA比IHA的特异性强。
  关键词:鹦鹉热衣原体;布鲁菌病;血清;人兽共患病
  衣原体病是由鹦鹉热衣原体所引起的各种畜禽及人类共患的传染病[1]。牛衣原体病是由鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)感染牛引起的一种多症状性传染病,主要表现为妊娠母牛流产、死产和产弱犊;新生牛多发生肺炎、肠炎、多发性关节炎、脑炎和结膜炎;种公牛发生睾丸炎等[2]。人感染鹦鹉热衣原体后,症状和体征变化多端,有人呈隐性无症状感染,有人呈持续性感染伴有临床症状,如发热、剧烈头痛、皮疹、腹泻、呕吐、肝炎、心肌炎和脾肿大等。
  布鲁菌病(Brucellosis)是由布鲁氏杆菌所引起的一种以胎盘炎和流产为特征的急性或慢性家畜传染病,以引起动物流产、不孕等生殖障碍性疾病为主要特点[3]。人是通过直接或间接途径与感染的家畜(主要是牛、猪、羊)接触而患病,患病后缺乏特异症状和体征。布鲁菌根据感染动物种类不同分为6个不同的种,牛布鲁菌是其中之一。
  近年来,在我国银川地区一些奶牛场相继出现了以奶牛流产为特征的一种传染性疾病,为了查清该病的原因,摸清人畜间的疾病流行关系。首先对银川地区的16个奶牛场进行了随机采血,进行了衣原体和布鲁菌病的血清学检测,现将检测结果报告如下。
  1 材料与方法
  1.1 材料
  1.1.1 抗鹦鹉热衣原体McAb 由课题组研制,并进行特异性检测。
  1.1.2 鹦鹉热衣原体抗原 按文献[1]方法自制。
  1.1.3 鹦鹉热衣原体标准阳性血清 由中国农业科学院兰州兽医研究所提供,批号为050519,IHA效价在1∶256以上。
  1.1.4 鹦鹉热衣原体标准阴性血清 由中国农业科学院兰州兽医研究所提供,批号为050519。
  1.1.5 鹦鹉热衣原体IHA抗原 由中国农业科学院兰州兽医研究所提供,批号为050525。
  1.1.6 布鲁菌虎红平板凝集抗原 由中国CDC传染病所提供,批号为200504。
  1.1.7 被检血清采自银川及周边地区16个牛场共1 161份血清,冻结备用。
  1.2 方法
  1.2.1 鹦鹉热衣原体McAb-ELISA方法 用pH9.6碳酸盐缓冲液将McAb 100倍稀释后包被于40孔酶标板100 μL/孔,置4 ℃过夜,加10%脱脂乳100 μL/孔,封闭,置37 ℃作用1 h;用PBS-T缓冲液洗板3次,加入100倍稀释的衣原体已知抗原100 μL/孔,置37 ℃ 1 h,用PBS-T缓冲液洗板3次,加入1∶5倍待检血清100 μL/孔,置37 ℃ 1 h,用PBS-T缓冲液洗板3次;加驴抗羊、兔抗猪和兔抗牛IgG辣根过氧化物酶结合物100 μL/孔;置37 ℃ 1 h,用PBS-T缓冲液洗板 3次;加邻苯二胺底物缓冲液100 μL/孔,显色30 min;加50 μL/孔2 mol/L H2SO4 终止反应。测OD490nm值。同时设阴性,阳性血清和空白对照,结果判定OD值≥0.18时判为阳性。
  1.2.2 鹦鹉热衣原体IHA试验方法 按中国农业科学院兰州兽医研究所提供的检测方法进行。判定标准按诊断液标明的标准(抗体效价达到或超过1∶64判为阳性)进行。
  1.2.3 McAb-ELISA方法与IHA试验方法的比较 应用两种方法分别对同样50份待检牛血清进行衣原体抗体的比较检测。
  1.2.4 布鲁菌虎红平板凝集试验 从样品血液分离血清,吸取30 μL滴于洁净玻璃板上,加入30 μL虎红平板凝集抗原,混匀后4 min观察结果,出现肉眼可见的凝集,判为阳性(+);无凝集的判为阴性(-)。
  2 结果
  2.1 衣原体ELISA和IHA的比较结果
  对随机抽取的50份牛血清采用2种试验方法同时进行检测,牛血清ELISA阳性检出率为32%(16/50),IHA为24%(12/50),前者比后者高6%。
  2.2 衣原体和布鲁菌病检测结果
  应用研制的抗鹦鹉热衣原体McAb[1]检测16个规模化牛场,在被检血清中衣原体和布鲁菌病结果见表1。
      由表1可以看出衣原体1 161份血清中总的阳性率为9.22%,很高的阳性率达到了53.1%(68/128),很低为0%。检测牛场的阳性率为68.75%(11/16)。
  1 161份血清中布鲁菌病总的阳性率为13.26%,很高的阳性率达到了37.5%(3/8),很低为0%。检测牛场的阳性率为56.25%(9/16)。
  2.3 在被检的16个牛场1 161份牛血清中有4个牛场的9头牛血清中衣原体和布鲁菌检测均为阳性, 阳性率为0.78%(9/1 161)。
   2.4 在布鲁菌病检测中,被检的16个牛场1 161份牛血清中的154份阳性血清中,犊牛的阳性率为21.43%(33/154),成年牛的阳性率为78.57%(121/154)。
  3 讨论
  3.1 把研制的抗衣原体特异性McAb用于诊断,采用ELISA方法检测牛血清中的衣原体,结果表明,研制的抗衣原体特异性McAb具有高度的特异性,采用的ELISA方法具有较高的灵敏性,是可行的。通过ELISA方法与传统的HIA方法试验比较,ELISA方法检测的阳性率明显高于HIA试验,两种方法的诊断符合率为88%。
  3.2 应用McAb-ELISA方法除比IHA试验方法具有更高的特异性和敏感性外,ELISA方法在实际应用中还具有从加样到结果判定均可自动化,可减少操作和判定中的技术误差,以及检查样品容量大等较明显的优点和方便,这样都有助于衣原体病的早期诊断和流行病学调查。
  3.3 本试验对来自银川周边地区的16个牛场1 161份牛血清进行的衣原体病的McAb-ELISA试验和布鲁菌病的虎红平板凝集试验结果中可以看出,大部分牛只是单纯感染一种病,还有少部分牛既感染了衣原体又感染了布鲁菌病,同时感染这两种疾病的牛场流产率明显高于只感染一种疾病的牛场。这将对疾病的防治提出更高的要求。
 

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樱井英幸

樱井英幸

河北一洲肿瘤医院

擅长:质子治疗,放射治疗,质子束疗法治疗肝癌,X射线治疗,近距离放射治疗

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